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产品简介

EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒

EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒

价格:电议

采购度:643    原产地:中国大陆

发布时间:2019/2/26 10:25:06

EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒 不用提取细胞的DNA,将细胞样品经过30分钟简单处理后,直接用于PCR扩增。可用于细胞DNA的克隆、基因编辑细胞的PCR鉴定、DNA病毒基因扩增、DNA病毒诊断等。

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标签:DNA直扩PCR试剂盒   PCR试剂盒   

详细信息

创凌生物为您提供EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒,期待您的选购!

产品资料
产品名称:
EZ细胞及动物组织DNA直扩PCR试剂盒
英文名称:EZ Cell and Tissue DNA Direct PCR Kit
产品规格:50T/200T
产品价格:420/1350
试剂盒产品用途
动物组织或细胞DNA的扩增与克隆、转基因细胞株筛选、DNA病毒基因扩增、DNA病毒普通PCR诊断、DNA病毒Real-time PCR诊断(Taqman法)等。
试剂盒组成:
DNA-EZ-1、DNA-EZ-2、DNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
-20ºC保存。使用将DNA-EZ-1、DNA-EZ-3在室温或37ºC充分溶解。DNA-EZ-2和2×TaqMix需置于冰上。
1、细胞或组织样品中DNA的扩增
1 将DNA-EZ-1与DNA-EZ-2以5:1的比例充分混合。
2 取20 µL细胞样品(105-106 cells/mL)或研磨的组织样品,加入6 µL上述混合液,混匀。
3 置于50ºC静置10分钟后,再置于95ºC加热10分钟。
4 加入50 μL的DNA-EZ-3,混匀。
5 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。
2、组织块中DNA的扩增
1 用H2O将DNA-EZ-1稀释5倍,每25 μL的DNA-EZ-1稀释液加入1 μL的DNA-EZ-2,混合均匀。
2 切取半颗米粒大小的组织块(< 3 mm3),并完全浸入上述混合液中。
3 50ºC加热30分钟,每隔10分钟取出混匀次。
4 95ºC加热10分钟。
5 加入50 μL的DNA-EZ-3,混匀。
6 取2 μL上述处理液进行PCR扩增。
3、Real-time PCR
取上述细胞或组织处理液,加入特异性引物和Taqman探针,可进行特异性靶标DNA的绝对定量检测。
取上述细胞或组织处理液,加入SYBR Green PCR试剂(需自备),可进行特异性靶标DNA的相对定量检测。
4、PCR加样体系
成分
25 μL体系(推荐)
50 μL体系
2×TaqMix
12.5 μL
25 μL
Forward Primer (10 μM)
1 μL
2 μL
Reverse Primer (10 μM)
1 μL
2 μL
Template DNA
2 μL
2 μL
H2O
8.5 μL
19 μL
 

5、PCR程序设定

步骤
温度
时间
循环数
预变性
94
5 min
 
变性
94
30 s
 
30-35
退火
50~72
30 s
延伸
72
1 kb/min
终延伸
72
10 min
 
 
4
Hold
 

(1)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。
(2)样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性对照参与处理过程,以检测环境的污染。
(3)PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5ºC,或者通过梯度PCR摸索佳退火温度。
(4)上述步骤同样适用于相应的细胞或组织中DNA病毒的PCR诊断。在进行组织中DNA病毒的诊断时,为保证准确度,推荐将病料组织研磨后再进行上述处理和扩增。
(5)TaqMix中加入了染料和相应试剂,普通PCR后可直接进行电泳,无需另加Loading buffer。
(6)处理96孔板中的细胞时,可如“组织块DNA扩增”第1步中的方法,配置裂解液后,使用排枪直接加入96孔板裂解细胞,实现高通量操作。
(7)TaqMix中的染料不影响Taqman探针的效果。
(8)使用中有任何问题欢迎扫描包装袋二维码,加QQ或微信进行咨询。

更新时间:2024/1/4 13:19:47

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