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产品简介

EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法)

EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法)

价格:电议

采购度:507    原产地:中国大陆

发布时间:2019/2/26 10:46:54

EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法) 不需提取细胞RNA,经过30分钟简单处理后,直接进行RT-PCR扩增。可用于细胞基因的克隆、基因表达定量、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR诊断等。

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详细信息
本公司日报道:
产品资料
产品名称:EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法)
英文名称:EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit(One Step)
产品规格:30T/100T
产品报价:1200元/3000元
试剂盒应用:细胞组织或细胞基因的扩增与克隆、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR.
试剂盒组成:RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O
保存条件:-20ºC保存。使用将RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室温或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4RT-Enzyme使用时需置于冰上。
细胞中RNA的扩增
(1)将6ul RNA-EZ-13ul RNA-EZ-2充分融合
(2)20ul细胞悬液(10^5-10^6cells/ml),加入上述混合液,混匀
(3)置于37ºC静置10分钟。
(4)加入1ul RNA-EZ-3,混匀
(5)置于37ºC静置15分钟。
6)置于98ºC加热5分钟。
7)加入60ul的RNA-EZ-4,混匀。
(8)取2ul(7)中处理液进行RT-PCR扩增。
组织块中RNA的扩增
(1)用 H2O 将 RNA-EZ-1 稀释 5 倍,每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀释液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2,混合均匀。同时处理多个组织块时,可以按照以上比例配制预混液并分装到每个离心管 26 µL。
(2)切取半颗米粒大小的组织块(< 3 mm3),完全浸入上述混合液中。
(3)置于 37ºC 静置 10 分钟。
(4)加入 1µL RNA-EZ-3,混匀。
(5)置于 37ºC 静置 15 分钟。
(6)置于 98ºC 加热 5 分钟。
(7)加入 60 μL RNA-EZ-4,混匀。
(8)取 2 μL(7)中处理液进行 RT-PCR 扩增。
Real-Time PCR
取上述细胞或组织处理液,加入特异性引物和 TaqMan 探针,可进行特异性靶标 RNA 的绝对定
量检测。如需进行 SYBR Green Real-time PCR,请选择 EZ021-01/-02(EZ® Cell and Tissue RNA Direct
PCR Kit(One Step))。
在 RNase free 的离心管中配制 PCR 反应体系
 
25 μL 体系(推荐)
50 μL 体系
2×RT-Buffer
12.5 μL
25 μL
RT-Enzyme
1 μL
2 μL
Forward Primer (10 μM)
1 μL
2 μL
Reverse Primer (10 μM)
1 μL
2 μL
Template DNA
2 μL
2 μL
RNase free ddH2O
7.5 μL
17 μL
按照以下方法设定 PCR 反应
步骤
温度
时间
循环数
反转录
50 ℃
30 min
 
预变性
94 ℃
3 min
 
变性
94 ℃
30s
30-35
退火
50-72 ℃
30s
30-35
延伸
72 ℃
30s-3min(1 kb/min)
30-35
终延伸
72 ℃
10min
 
 
4 ℃
Hold
 
 
(1)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。
(2) 样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性对照参与处理过程,以检测环境的污染。
(3)用本产品扩增的 RNA 不宜太长,1000bp 及以内的片段佳,期研究中可扩增长达 1800bp的片段,扩增片段越长效率越低。扩增的成功率也与 RNA 的丰度、二结构以及引物等有关。
(4)本产品同样适用于相应的细胞或组织中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 诊断。
(5)2×RT-Buffer 中加入了染料和相应试剂,可直接进行电泳,无需另加 Loading buffer。
(6)处理 96 孔板中的细胞时,可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制预混液,使用多道移液器直接加入 96 孔板经 DPBS 洗涤的细胞中,实现高通量操作。
(7)2×RT-Buffer 中的染料不影响 TaqMan 探针的效果。
公司介绍
创凌生物直致力于生命医学和生物技术域的积累与沉淀,目创凌生物技术研发团队50余人,配备了的分析和检测设备,通过自主创新以及与国内外的科研单位合作研发,不断突破新技术,质量成熟,各类产品和技术服务赢得了众多科研机构的认可。

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释,用EZ010试剂盒处理后,加入特异性Taqman探针,进行qPCR扩增,检测曲线呈现明显的梯度关系,样品间重复性良好,Ct值线性模拟R2=0.9978

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释,用EZ010试剂盒处理后,加入特异性Taqman探针,进行qPCR扩增,检测曲线呈现明显的梯度关系,样品间重复性良好,Ct值线性模拟R2=0.9978

更新时间:2024/1/4 13:19:47

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