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点击次数:3282 发布时间:2021/8/25 16:03:18
1、转染试剂用量:10ul
2、DNA/siRNA浓度:电讯
3、细胞密度:1*106-1*105
4、转染用培养板:6孔板
5、转染试剂:AD600025 Advanced DNA RNA转染试剂
6、转染时间:15小时
7、细胞培养胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清
8、细胞冻存液:L0100无血清细胞冻存液
操作过程:
1.提1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。
2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合,用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。
3.在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基里面可以含有血清。
4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。
5.分析结果:质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。
原创作者:上海创凌生物科技有限公司